產(chǎn)品詳情
采集方法:
1)用采樣拭子采取足夠數(shù)量的糞便樣本(每管保存液采集至少0.2g新鮮糞便樣品,最多可保存0.5 g糞便樣本)。
2)將帶有足夠數(shù)量樣品的采樣拭子刷放進裝有糞便保存液的小瓶內(nèi),并快速攪動十次左右,以洗脫刮刷上樣品,然后從尾部推進采樣拭子頭部,擰緊瓶蓋。
4.保存條件:保存液可在常溫條件下糞便中宿主與微生物的DNA可保存60天,在-20℃和-80℃下可長期保存。
糞便核酸提取方法:
磁珠法(適用于全自動核酸提取儀)
1)轉(zhuǎn)移600 μl樣品(或稱取糞便樣本180-300 mg)至2 ml離心管中。
2)加入600μlCY1(液體樣本不加CY1),15 μL蛋白酶K,使樣本均勻分散于溶液中。
3)在70℃加熱懸浮液5min(難以溶解的細胞溶解溫度可以提高到95℃)
4)12000rpm離心1min,取出全部上清到新的離心管,加10uL磁珠和0.25mLCY2,充分混勻(可用混勻器),放置在磁力架上靜置約20s,吸掉液體。
5)加入0.6mLCY3液體,充分混勻(可用混勻器),放置在磁力架上靜置約20s,吸掉液體。
6)加入0.6mLCY4液體,充分混勻(可用混勻器),放置在磁力架上靜置約20s,吸掉液體。
7)加入0.6mLCY4液體,充分混勻(可用混勻器),放置在磁力架上靜置約20s,吸掉液體。
8)將離心管從磁力架上取下短暫離心,之后將離心管重新放回磁力架上,吸干液體。
9)室溫干燥5-10min,加50μLCY5液體,混勻;置于65°C空氣培養(yǎng)箱培養(yǎng)10min,期間渦旋混勻三次或置于65℃轉(zhuǎn)速1600rpm金屬浴中孵育5min; 磁力架上靜置約20s,轉(zhuǎn)移液體到新的離心管,測OD。
注:OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用ddH2O,比值會偏低,因為pH值和離子存在會影響光吸收值,但并不表示純度低。
如需去除RNA,可在上述步驟完成后,加入4μl濃度為100 mg/ml的RNase A溶液,震蕩混勻,室溫放置5-10分鐘。
吸附柱法
1)轉(zhuǎn)移600 μl樣品(或稱取糞便樣本180-300 mg)至2 ml離心管中。
2)加入600μlCY1(液體樣本不加CY1),15 μL蛋白酶K,使樣本均勻分散于溶液中。
3)在70℃加熱懸浮液5min(難以溶解的細胞溶解溫度可以提高到95℃)
4)12000rpm離心1min,取出全部上清到新的離心管, 加入250 μlCY2,此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀。蓋上管蓋并渦旋振蕩15 sec,徹底混勻。充分混勻(可用混勻器)。簡短離心以收集附著在管壁及管蓋的液體。
5) 仔細將離心管中的溶液和絮狀沉淀全部轉(zhuǎn)移至吸附柱CR2。
注意:如果吸附柱上的液體未能全部離心至收集管中,請加大轉(zhuǎn)速,延長離心時間至液體完全轉(zhuǎn)移到收集管中。
6) 加入600 μlCY3,12000rpm離心1min。
7) 加入600 μlCY4,12000rpm離心1min。
8) 洗脫液(無DNA酶的水 ddH2O),12000rpm離心1min。
將吸附柱置于一個新的收集管(無DNA酶的 Centrifuge Tube )中,向吸附柱膜的中間部位懸空加入50μLCY5,室溫放置2-5分鐘,12000 rpm離心 1分鐘,收集核酸溶液。